Terminação da sinalização da endotelia: Papel do óxido nítrico

Os mecanismos celulares responsáveis pela terminação do sinal ET-1 são pouco compreendidos. Para examinar a hipótese de que o óxido nítrico serve como um freio fisiológico da sinalização do ET-1, células de ovário de hamster chinês (CHO) transfectadas de forma estável com a cDNA do receptor ETA (CHO-ET) foram estudadas. As células CHO-ET responderam ao ET-1 com transientes de Ca2+i robustos e desenvolveram uma dessensibilização homóloga de longa duração. Donores de óxido nítrico (NO), 3-morfolino-sidnonimina HCl (SIN-1), ou nitroprussiato de sódio (SNP) reduziram a amplitude dessas respostas, aceleraram a taxa de recuperação de Ca2+i e combateram o desenvolvimento da dessensibilização homóloga por um mecanismo independente de GMP cíclico, sugerindo um modo alternativo para a modulação de NO nas respostas ao ET-1. A estimulação das células CHO-ET com mastoparana, um veneno de vespa que atua diretamente nas proteínas G (bypassing receptor activation), foi inibida pelo NO, revelando um alvo pós-receptorial para a modulação induzida por NO da mobilização de Ca2+i. Usando um ET-1 biotinilado lys9 (ET-1 BtK9), os locais de ligação foram "mapeados" nas células CHO-ET. Os complexos receptor-ligante não apresentaram dissociação espontânea durante 60 minutos de observação. A microscopia de fluorescência quantitativa revelou que SNP ou SIN-1 causaram uma dissociação rápida, dependente da concentração e reversível do ET-1 biotinilado do receptor ETA (EC50 = 75 microM e 6 microM, respectivamente), um efeito que não foi mimetizado por 8-bromo-c GMP cíclico. A co-cultura "em sanduíche" de células endoteliais com CHO-ET mostrou que a ativação da produção de NO por células endoteliais resultou de maneira similar na dissociação do ET-1 BtK9 dos receptores ETA. Hipotetizamos que o NO desempenha um papel na terminação fisiológica da sinalização do ET-1 por mecanismos duais: (1) deslocamento do ET-1 ligado de seu receptor, assim impedindo a dessensibilização homóloga, e (2) interferência no caminho pós-receptoral para a mobilização de Ca2+i, inibindo assim as respostas finais ao ET-1.