オリゴデオキシヌクレオチド-アルカリフォスファターゼ複合体の調製とハイブリダイゼーションプローブとしての利用

短い合成オリゴヌクレオチドは、ホモビシェンク剤ジスアスチニミジルシュベレートを用いてアルカリフォスファターゼに共有結合的に交差連結されています。オリゴマーは、21塩基から26塩基の長さで、ヘルペスウイルス、B型肝炎ウイルス、カンピロバクター・ジェジュニ、腸管毒素性大腸菌に見られる特異的な配列に相補的です。各オリゴマーは、反応性アミンで終端した12原子の「リンカーアーム」を持つ単一の修飾塩基を含んでいます。このアミンを介した交差連結は、完全なアルカリフォスファターゼ活性を持ち、硝酸セルロースに固定されたターゲットDNAに15分以内にハイブリダイズできる1オリゴマーあたり1酵素分子から成るオリゴマー-酵素複合体を生成します。ハイブリッドは、開発時間4時間において、ターゲットDNAの10^6分子（2 × 10^(-18) mol）の感度で色素沈着アッセイによって直接検出されます。酵素は、オリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションの選択性や動力学に明らかな影響を及ぼさず、複合体は従来の方法でハイブリダイズおよびメルトオフできます。