Interacción del N-Terminus de la Cadenita Ligera Esencial 1 del Esqueleto de Pollo con F-Actina

La miosina esquelética tiene dos isoformas de la cadena ligera esencial (ELC), llamadas LC1 y LC3, que solo difieren en su secuencia de aminoácidos N-terminal. La LC1 tiene 41 residuos adicionales que contienen siete pares de Ala-Pro, que forman una estructura alargada, y dos pares de lisinas ubicadas cerca del N-terminal. Cuando el subfragmento de miosina-1 (S1) se une a la actina, estas lisinas pueden interactuar con el C-terminal de la actina y ser responsables de las propiedades específicas de la isoforma de la miosina. Aquí empleamos el entrecruzamiento para identificar los residuos de LC1 que están en contacto con la actina. S1 fue reconstituido con varios mutantes de LC1 y reaccionó con el entrecruzador de longitud cero 1-etil-3-3-dimetil-amino-propil-carbodiimida (EDC). El entrecruzamiento ocurrió solo cuando la actina estaba en exceso molar sobre S1. La LC1 tipo salvaje podría ser entrecruzada a través del grupo terminal alfa-NH2, así como a través de los dos pares de lisinas. En un mutante de ELC, donde se eliminaron las lisinas pero se introdujeron dos argininas cerca del N-terminal, la cadena ligera aún se podía entrecruzar a través del grupo terminal alfa-NH2. Cuando se redujo la carga en la región N-terminal manteniendo la región rica en Ala-Pro, el mutante no pudo ser entrecruzado. Estos resultados sugieren que mientras el N-terminal contenga residuos cargados y una extensión rica en Ala-Pro, la unión entre LC1 y actina puede ocurrir.