Isolamento e Caracterização de Células Dendríticas e Macrófagos do Intestino de Camundongo

Dentro do intestino residem populações únicas de células imunológicas inatas e adaptativas que estão envolvidas na promoção da tolerância em relação à flora comensal e antígenos alimentares, ao mesmo tempo em que permanecem prontas para montar respostas inflamatórias contra patógenos invasivos. Células apresentadoras de antígenos, particularmente as DCs e macrófagos, desempenham papéis críticos na manutenção da homeostase imunológica intestinal por meio de sua capacidade de detectar e responder adequadamente à microbiota. O isolamento eficiente de DCs intestinais e macrófagos é um passo crítico na caracterização do fenótipo e função dessas células. Embora muitos métodos eficazes para o isolamento de células imunológicas intestinais, incluindo DCs e macrófagos, tenham sido descritos, muitos dependem de longos tempos de digestão que podem influenciar negativamente a expressão de antígenos na superfície celular, a viabilidade celular e/ou a quantidade de células. Aqui, detalhamos uma metodologia para o isolamento rápido de grandes quantidades de DCs e macrófagos intestinais viáveis. A caracterização fenotípica de DCs e macrófagos intestinais é realizada através da coloração direta de células intestinais isoladas com anticorpos monoclonais específicos marcados com fluorescência para análise por citometria de fluxo multicolorida. Além disso, populações de DCs e macrófagos altamente puras são isoladas para estudos funcionais utilizando beads magnéticos de separação celular ativada por CD11c e CD11b, seguidos pela separação celular.