Extraction and Estimation of ATP from Human Spermatozoa

Summary: This study attempts to provide guidelines for the extraction and estimation of ATP from spermatozoa. The conditions of extraction of ATP from spermatozoa using trichloroacetic acid were optimized. The efficiency of this extraction procedure was compared to that using boiling Tris buffer. Three commercially available kits which use the firefly luciferase assay for ATP and two luminometers were evaluated for the measurement of the spermatozoa extracts. Elevated levels of Mg2+ and/or Ca2+ did not interfere with the extration of ATP by trichloroacetic acid or with the subsequent estimation of the nu-cleotide. Extraktion und Bestimmung von ATP in menschlichen Spermatozoen Zusammenfassung: Die vorliegende Untersuchung versucht Richtlinien aufzustellen für die Extraktion und Bestimmung von ATP in menschlichen Spermatozoen. Die Extrak-tionsbedingungen für ATP wurden unter Verwendung von Trichloressigsäure optimiert. Die Effizienz des Extraktionsverfahrens wurde mit einem Verfahren verglichen, bei wel-chem siedender Tris-Puffer Verwendung fand. Es wurden drei handelsübliche Kits, welche den Leuchtkäfer-Luciferase-Assay für ATP und zwei Luminometer benutzen, für die Mes-sung der Spermatozoenextrakte bewertet. Die erhöhten Werte von Mg2+ und/oder Ca2+ interferiersen nicht mit der Extraktion von ATP mittels Trichloressigsäure oder mit der nachträglichen Bestimmung des Nukleotids.