Comparison of Pathogenesis Related “b1” Protein Determination Obtained by ELISA and HPLC Techniques

A comparison was done between HPLC and ELISA for quantitative determination of the PR‐b1 protein, the major pathogenesis related “b” protein (PR‐b), in both healthy and TMV infected Nicotiana tabacum cv. Xanthi nc leaves. The PR‐b1 protein antiserum, used for double antibody sandwich (DAS) Enzyme linked Immunosorbant Assay (ELISA), was sensitive enough to detect PR‐b1 and other PR‐b1 related proteins at concentrations as low as 250 pg/ml. Since N. tabacum cv. Xanthi nc PR‐b2 and PR‐b3 proteins were shown to be serologically closely related to PR‐b1 protein, the validity of determining PR‐b1 by DAS ELISA test had to be established. By comparing PR‐b1 protein levels in healthy and TMV infected plants, it was found that PR‐b2 and PR‐b3 interfered little with PR‐b1 estimations. A good correlation existed between PR‐b1 determinations by HPLC and ELISA. Zusammenfassung Ein Vergleich der pathogenesegekoppelten “b1”‐Proteinbestimmung durch ELISA‐ und HPLC‐Verfahren Verglichen wurden ELISA‐ und HPLC‐Verfahren bei der quantitativen Bestimmung des PR‐bl‐Proteins, ein bedeutendes pathogenesegekoppeltes “b1”‐Protein (PR‐b), in gesunden und TMV‐infizierten Nicotiana tabacum cv. Xanthi nc‐Blättern. Das PR‐bl‐Protein‐Antiserum, das beim Double Antibody Sandwich (DAS) enzymgekoppelte Immunosorbant Assay (ELISA) angewandt wurde, hatte eine Empfindlichkeit, die PR‐bl und andere PR‐bl verwandte Proteine bei Konzentrationen ab 250 pg/ml wahrnehmen konnte. Da die PR‐b2‐ und PR‐b3‐Proteine von N. tabacum cv. Xanthi nc serologisch eng mit dem PR‐bl‐Protein verwandt sind, wurde die Gültigkeit einer PR‐bl‐Bestimmung durch einen DAS ELISA‐Test erstmals festgestellt. Nach einem Vergleich der PR‐bl ‐Proteingehalte in gesunden bzw. TMV‐infizierten Pflanzen wurde ermittelt, daß PR‐b2 und PR‐b3 die PR‐bl‐Bestimmungen kaum beeinflussen. Eine gute Korrelation wurde zwischen den PR‐bl‐Bestimmungen nach HPLC‐ und ELISA‐Verfahren beobachtet.