Effects of various inhibitors including carboxin on Botrytis cinerea mitochondria isolated from mycelium

— Due to the development of resistant srains, the practical control of Botrytis cinerea remains a problem.Little is known about its respiratory chain and this paper describes the preparation and the properties of B cinerea mi- tochondria with the aim of testing new antifungal compounds.NADH, succinate and α-ketoglutarate as substrates pro- vided good oxygen consumption.Respiratory control ratios were high and showed that electron transport was well coupled to oxidative phosphorylation.The phosphorylation efficiencies (ADP/O) obtained with all 3 substrates were compatible with theoretical values.The addition of cytochrome c did not greatly enhance the oxygen consumption due to ascorbate: the quality of the outer mitochondrial membrane was good enough to prevent externally added cyto- chrome c from interacting easily with the respiratory chain.These observations indicate that the mitochondria isolated sustain a high level of structural and functional integrity.This study showed also that they were devoid of the alterna- tive pathway resistant to antimycin A and cyanide, but that they exhibited a rotenone-insensitive respiratory route.The action and the effective doses of oligomycin, carbonylcyanide m-chlorophenylhydrazone (CCCP) and carboxyatracty- loside on B cinerea mitochondria were similar to those observed with plant mitochondria.At 10 μM, carboxin comple- tely inhibited succinate oxidation in mitochondria from B cinerea but failed to have any effect on NADH and α- ketoglutarate oxidation.This toxicity level was comparable to that reported by other authors with members of the fun- gal class Basidiomycetes.respiration inhibitors / rotenone insensitive route / carboxin / alternative pathway / B cinerea Résumé — Effets d'inhibiteurs dont la carboxine sur les mitochondries de Botrytis cinerea isolées de mycélium.Du fait de l'apparition de phénomènes de résistance aux produits anti-Botrytis, la lutte contre la pourriture grise demeure un problème.La chaîne respiratoire de B cinerea, dont on connaît peu de chose, pourrait constituer une cible intéressante pour découvrir des produits de remplacement.Cet article décrit une méthode simple pour préparer des mitochondries de B cinerea et précise leurs caractéristiques.Le NADH, le succinate et l'α-cétoglutarate sont des substrats qui stimulent fortement la consommation d'oxygène.Les contrôles respiratoires sont élevés et prouvent que le transport des électrons est bien couplé à la phosphorylation oxydative.Les rapports ADP/O obtenus avec les 3 substrats sont compatibles avec les valeurs théoriques.L'addition de cytochrome c n'augmente pas notablement la consommation en oxygène provoquée par l'ascorbate : la qualité de la membrane externe des mitochondries est suffi- sante pour empêcher le cytochrome c de réagir sur la chaîne respiratoire.Ces observations montrent que les mito- chondries isolées présentent une bonne intégrité tant sur le plan structural que fonctionnel.Cette étude montre aussi qu'elles ne possèdent pas une voie alternative résistante à l'antimycine A et au cyanure mais présentent une voie in- sensible à la roténone.Les effets et les niveaux d'activité de l'oligomycine, du carbonylcyanide m- chlorophénylhydrazone (CCCP) et du carboxyatractyloside sur les mitochondries de B cinerea ont été similaires à ceux généralement observés avec les mitochondries végétales.A 10 μmol.l-1 , la carboxine inhibe complètement l'oxydation du succinate par les mitochondries de B cinerea mais n'a aucun effet sur les oxydations du NADH et de l'α-cétoglutarate. Ce niveau de toxicité est comparable à celui relevé par d'autres auteurs avec des champignons ap- partenant à la classe des Basidiomycètes.inhibiteur de la respiration / voie résistante à la roténone / carboxine / voie alternative / B cinerea