Die stimulierte Sekretion des endothelialen von-Willebrand-Faktors geht mit einer schnellen Umverteilung des intrazellulären Granulammembranproteins GMP-140 zur Zelloberfläche einher

Wir haben die zellaktivierungsabhängige Umverteilung des intrazellulären Granulammembranproteins GMP-140 von humanen endothelialen Zellen untersucht. Durch Doppelmarkierungs-Immunfluoreszenz wurde festgestellt, dass die Verteilung von GMP-140 innerhalb kultivierter humaner umbilicalen Venenendothelzellen mit der Verteilung des von-Willebrand-Faktors (vWF) übereinstimmt, was darauf hindeutet, dass GMP-140 in den Membranen der vWF-haltigen Speichergranula lokalisiert ist. Die Stimulation der vWF-Sekretion führte zu einer Zunahme von GMP-140 an der Zelloberfläche, wie durch eine erhöhte Bindung des monoklonalen Antikörpers S12 nachgewiesen, der die extrazytoplasmatische Domäne von GMP-140 erkennt. Für jeden getesteten Agonisten (Histamin, Thrombin, Phorbol 12-Myristat 13-Acetat und den Calcium-Ionophor A23187) wurde eine dosisabhängige Umverteilung von GMP-140 zur Endothelausfläche beobachtet, die eng mit der dosisabhängigen Sekretion von vWF in den Zellüberstand korrelierte. Als die Zellen maximal durch Histamin in Anwesenheit des Antikörpers S12 stimuliert wurden, wurde ein vierfacher Anstieg der S12-Aufnahme durch die Zellen beobachtet. Dieser Anstieg trat schnell auf und erreichte ein Plateau nach 10 Minuten. Im Gegensatz dazu wurde bei Histamin-stimulierten Zellen, die zuerst mit Paraformaldehyd fixiert oder auf 4 Grad C abgekühlt wurden, bevor Antikörper S12 hinzugefügt wurde, nur ein vorübergehender Anstieg des zellulären GMP-140 an der Zelloberfläche festgestellt. Unter diesen Bedingungen, bei denen die Membranumsatz während der Antikörperbindung gestoppt wurde, war das zelluläre GMP-140 maximal 3 Minuten nach Histamin-Stimulation und fiel dann nach 20 Minuten auf das Kontrollniveau zurück. Diese Daten legen nahe, dass die stimulierte Sekretion von vWF aus endothelialen Zellen die Fusion von vWF-haltigen Speichergranula mit der Plasmamembran umfasst. Nachdem GMP-140 in die Plasmamembran eingefügt wurde, wird es anschließend am endothelialen Oberfläche entfernt, höchstwahrscheinlich durch einen endozytischen Mechanismus.