Einfaches, schnelles Verfahren zur direkten Isolierung von Nukleinsäuren aus aquatischen Umgebungen

Die direkte Isolierung von Nukleinsäuren aus der Umwelt kann in mehreren Aspekten nützlich sein, einschließlich der Schätzung der Gesamtbiomasse, der Erkennung spezifischer Organismen und Gene, der Schätzungen der Artenvielfalt und der Klonierungsanwendungen. Wir haben ein Verfahren entwickelt, das die Konzentration von Mikroorganismen aus aquatischen Proben und die Extraktion ihrer Nukleinsäuren erleichtert. Natürliche Wasserproben von 350 bis über 1000 ml werden auf einer einzelnen zylindrischen Filtermembran (Typ SVGS01015; Millipore Corp., Bedford, Mass.) konzentriert, und Zelllyse sowie Proteolyse erfolgen innerhalb des Filtergehäuses. Rohlösungen mit hochmolekularen Nukleinsäuren werden dann vom Filter abgezogen. Diese Lösungen können sofort analysiert, konzentriert oder gereinigt werden, je nach beabsichtigter Anwendung. Das Verfahren ist einfach, schnell und kostengünstig und liefert hochmolekulare chromosomale DNA, Plasmid-DNA und spezies-spezifische RNAs, die mit 5S, 16S und 23S rRNAs komigrieren. Die hier vorgestellten Methoden sollten sich als nützlich erweisen, um sowohl die Ökologie als auch die Phylogenie von Mikroben zu untersuchen, die klassischen Kulturmethoden widerstehen.