Domaine d'activation 1 de Zap1 et son rôle dans le contrôle de l'expression des gènes en réponse au statut en zinc cellulaire

Le facteur de transcription Zap1 est un acteur central de l'homéostasie du zinc chez la levure. Cette protéine régule l'expression des gènes impliqués dans l'accumulation et le stockage du zinc. Pour la plupart de ses gènes cibles, Zap1 active l'expression dans des cellules limitées en zinc et cette fonction est inhibée dans des cellules complètes. Zap1 possède deux domaines d'activation, AD1 et AD2, qui sont régulés indépendamment par le statut en zinc. Dans cette étude, nous avons caractérisé AD1 et sa régulation par le zinc. AD1 a été cartographié en utilisant des délétions sur les résidus 332-402 de Zap1. La région requise pour la réponse au zinc de ce domaine d'activation, désignée 'ZRD(AD1), a été délimitée aux résidus 182-502. Ainsi, AD1 est intégré dans son domaine réactif au zinc plus large. En utilisant une combinaison d'analyses in silico, de mutagenèse aléatoire et de mutagenèse dirigée, nous avons identifié des résidus clés dans ZRD(AD1) nécessaires à sa régulation par le zinc. La plupart de ces résidus sont des cystéines et des histidines qui pourraient potentiellement servir de ligands au Zn(II). Ces résultats suggèrent que ZRD(AD1) détecte le zinc par liaison directe au Zn(II). Conformément à cette hypothèse, ZRD(AD1) purifié a lié de multiples ions Zn(II). Enfin, nos résultats indiquent que, dans le contexte de la protéine Zap1 de longueur complète, AD1 et AD2 sont tous deux critiques pour le contrôle total de l'expression des gènes en réponse au zinc.