Der Bicinchoninsäure (BCA) Test zur Proteinquantifizierung

Der Bicinchoninsäure (BCA) Test, erstmals beschrieben von Smith et al. (1), ähnelt dem Lowry-Test, da er auch von der Umwandlung von Cu2+ zu Cu+ unter alkalischen Bedingungen abhängt (siehe Kapitel 1). Das Cu+ wird dann durch Reaktion mit BCA nachgewiesen. Die beiden Tests haben eine ähnliche Empfindlichkeit, aber da BCA unter alkalischen Bedingungen stabil ist, hat dieser Test den Vorteil, dass er als ein Schritt durchgeführt werden kann, im Gegensatz zu den zwei Schritten, die im Lowry-Test erforderlich sind. Die Reaktion führt zur Entwicklung einer intensiven violetten Farbe mit einem Absorptionsmaximum bei 562 nm. Da die Produktion von Cu+ in diesem Test eine Funktion der Proteinkonzentration und der Inkubationszeit ist, kann der Proteingehalt unbekannter Proben spektrophotometrisch durch den Vergleich mit bekannten Proteinstandards bestimmt werden. Ein weiterer Vorteil des BCA-Tests ist, dass er im Allgemeinen toleranter gegenüber der Anwesenheit von Verbindungen ist, die den Lowry-Test stören. Insbesondere wird er nicht durch eine Reihe von Detergenzien und denaturierenden Agenzien wie Harnstoff und Guanidiniumchlorid beeinflusst, obwohl er empfindlicher auf die Anwesenheit von reduzierenden Zuckern reagiert. Sowohl ein Standardtest (0,1–1,0 mg Protein/ml) als auch ein Mikrotest (0,5–10 µg Protein/ml) werden beschrieben.