Die Akkumulation von gespleißter avianem Retrovirus-mRNA wird in S-Adenosylmethionin-depletierten Hühnerei-Embryofibroblasten gehemmt

Die Synthese und Verarbeitung von B77 avianem Sarkomavirus-RNA in infizierten Hühnerei-Embryofibroblasten wurde in Anwesenheit und Abwesenheit von Cycloleucin, einem kompetitiven Inhibitor der Synthese von S-Adenosylmethionin und somit einem Inhibitor der RNA-Methylierungen, verfolgt. In den S-Adenosylmethionin-depletierten avianen Sarkomavirus-infizierten Zellen wurde nach 24 Stunden Behandlung mit dem Inhibitor ein Anstieg der steady-state-Niveaus von genom-langer RNA und ein Rückgang der steady-state-Niveaus von subgenomischer RNA festgestellt. Die Gesamtzahl der virus-spezifischen RNA-Moleküle pro Zelle blieb jedoch unter beiden Bedingungen relativ konstant. Die Produktion von newly synthetisierte virus-spezifischen RNA in mit Cycloleucin behandelnden und unbehandelten Zellen, die mit einem transformationsdefekten Stamm des B77 avianen Sarkomavirus infiziert waren, wurde als Funktion der (3)H-Uridin-Beschriftungszeit verfolgt. Die Akkumulation von radioaktiver genom-langer 8,4-Kilobase (kb) RNA setzte in cycloleucin-behandelten Zellen fort, und die Produktion von Virusteilen erfolgte in normalen Raten, wie zuvor gezeigt durch die Einbau von markierten Nukleosid-Vorläufern oder Aminosäuren. Im Gegensatz dazu konnte newly synthetisierte 3,5-kb subgenomische mRNA, die putative mRNA für das Hüllproteinvorgängermolekül, in den behandelten Zellen nicht akkumulieren. Das Ausmaß der Hemmung beim Erscheinen der radioaktiven 3,5-kb RNA korrelierte mit dem Ausmaß der Hemmung der viralen genomischen und zellulären mRNA-Methylierungen und war eine Funktion der Cycloleucin-Konzentration. Unter Bedingungen, unter denen die Akkumulation von 3,5-kb Hüllproteinvorgänger-mRNA durch die Cycloleucin-Behandlung blockiert wurde, gab es signifikante Steigerungen der Syntheserate der Polypeptidprodukte der genom-langen RNA, der Vorläufer der nicht-glykosylierte gag-Proteine (Pr76(gag)), und der reversen Transkriptase (Pr 180(gag pol)) im Verhältnis zur Syntheserate des Hüllproteinvorgängers (gPr 92(env)). Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass es eine S-Adenosylmethionin-Anforderung für das Spleißen, jedoch nicht für die Synthese, Verpackung oder Messenger-Funktion der genom-langen RNA des avianen Retrovirus gibt. Mögliche Gründe für diese Anforderung werden diskutiert.