Isolation, Reinigung und Markierung von Neutrophilen aus dem Knochenmark von Mäusen für funktionale Studien und experimentelle Adoptivübertragungen

Neutrophile sind entscheidende Effektorenzellen des angeborenen Immunsystems. Sie werden schnell an Stellen akuter Entzündungen rekrutiert und üben schützende oder pathogene Effekte aus, abhängig vom inflammatorischen Milieu. Dennoch fehlt trotz der unverzichtbaren Rolle von Neutrophilen in der Immunität ein detailliertes Verständnis der molekularen Faktoren, die die Effektor- und immunpathogenen Wirkungen von Neutrophilen in verschiedenen Infektionskrankheiten und entzündlichen Bedingungen vermitteln, teilweise aufgrund ihrer kurzen Halbwertszeit, der Herausforderungen im Umgang mit diesen Zellen und dem Mangel an zuverlässigen experimentellen Protokollen zur Gewinnung ausreichender Mengen von Neutrophilen für nachfolgende funktionale Studien und experimentelle Adoptivübertragungen. Daher sind einfache, schnelle, wirtschaftliche und zuverlässige Methoden sehr wünschenswert, um ausreichende Mengen von Neutrophilen aus Mäusen zu ernten, um Funktionen wie Phagozytose, Tötung, Zytokinproduktion, Degranulation und Trafficking zu bewerten. Zu diesem Zweck präsentieren wir ein reproduzierbares Protokoll zur Dichtegradientenzentrifugation, das in jedem Labor angepasst werden kann, um große Mengen von Neutrophilen aus dem Knochenmark von Mäusen mit hoher Reinheit und Lebensfähigkeit zu isolieren. Darüber hinaus präsentieren wir ein einfaches Protokoll, das CellTracker-Farbstoffe verwendet, um die isolierten Neutrophilen zu markieren, die dann in Empfängermäuse adoptiert und in mehreren Geweben mindestens 4 Stunden nach der Übertragung mit Durchflusszytometrie verfolgt werden können. Mit diesem Ansatz kann die unterschiedliche Markierung von Neutrophilen aus Wildtyp- und gen-defizienten Mäusen mit verschiedenen CellTracker-Farbstoffen erfolgreich eingesetzt werden, um Wettbewerbsüberbevölkerungsstudien durchzuführen, die die direkte Rolle spezifischer Gene beim Trafficking von Neutrophilen aus dem Blut in Zielgewebe in vivo bewerten.