Une méthode générale de préparation in vitro et de mutagenèse spécifique des fragments d'ADN : étude des interactions protéine-ADN

Des fragments d'ADN spécifiques, marqués en bout, peuvent être préparés simplement et rapidement à l'aide de la réaction en chaîne par polymérase (PCR). De tels fragments sont adaptés à une utilisation dans des tests d'empreinte de protection par DNase I, des réactions de séquençage chimique, et pour la production et l'analyse de complexes de transcription de l'ARN polymérase pausing. De plus, un moyen général d'introduire une mutation spécifique à n'importe quelle position le long de la longueur de ces fragments générés par PCR est décrit. Ces procédures, qui peuvent contourner la nécessité de cultures de phages ou de plasmides à grande échelle, d'électrophorèse en gel préparative et du criblage de clones moléculaires, peuvent faciliter l'étude rapide des interactions spécifiques à la séquence entre protéines et ADN. Un moyen rapide d'éliminer les amorces d'oligonucléotides en excès des PCR terminées est également décrit.