Vinculin ist mit dem E-Cadherin-Adhäsionskomplex assoziiert

Cadherine vermitteln calciumabhängige Zell-Zell-Adhäsion, und diese Aktivität wird durch zytoplasmatische Wechselwirkungen zwischen Cadherinen, Cateninen und dem aktinbasierten Zytoskelett reguliert. Alpha-Catenin spielt eine entscheidende Rolle bei der transmembranen Verankerung von Cadherinen, und die Deletion von Alpha-Catenin hat gezeigt, dass sie die cadherinvermittelte Adhäsion deaktiviert, was zu einem nicht-adhesiven Phänotyp führt. Hier zeigen wir, dass Serum-Entzug die E-Cadherin-Expression erhöht und E-Cadherin-abhängige Adhäsion in der MDA-MB-468 Brustkrebszelllinie induziert. Diese Adhäsion trat trotz eines Mangels an Alpha-Catenin-Expression auf, die durch Mutationen im Alpha-Catenin-Gen verursacht wurde. Eine Kopräzipitationsanalyse legt nahe, dass diese Adhäsion durch zytoplasmatische Verbindungen von Cadherinen zum Zytoskelett vermittelt werden könnte, an denen Vinculin beteiligt ist. Ein hoher Vinculin-Spiegel, der mit E-Cadherin-Immunpräzipitaten assoziiert war, wurde in MDA-MB-468-Zellen beobachtet. Im Gegensatz dazu wurde Vinculin in E-Cadherin-Komplexen in den A431- und MCF-7-Epithelkarzinom-Zelllinien, die Alpha-Catenin exprimieren, nicht nachgewiesen. In reziproken Immunpräzipitationen unter Verwendung von Anti-Vinculin-Antikörpern assoziierte sich E-Cadherin jedoch stark mit Vinculin in MDA-MB-468-Zellen und in geringerem Maße in A431- und MCF-7-Zellen. Diese Ergebnisse legen nahe, dass sowohl Alpha-Catenin als auch Vinculin möglicherweise im Adhäsionskomplex vorhanden sind. Um die Hypothese zu testen, dass Vinculin über Beta-Catenin mit E-Cadherin-Komplexen assoziiert, wurde überschüssiges rekombinantes Beta-Catenin oder Alpha-Catenin-Fusionsprotein zu MDA-MB-468-Zelllysaten hinzugefügt. Beide inhibierten spezifisch die Kopräzipitation von E-Cadherin mit Vinculin und legen damit einen Wettbewerb um denselben Bindungsort nahe. Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass Vinculin eine Rolle bei der Etablierung oder Regelung des cadherinbasierten Zelladhäsionskomplexes durch direkte Interaktion mit Beta-Catenin spielt.