Zytoplasmatische Mikrotubuli-Bilder in mit Glutaraldehyd fixierten Gewebekulturzellen durch Elektronenmikroskopie und durch Immunfluoreszenzmikroskopie

Die Elektronenmikroskopie und die indirekte Immunfluoreszenzmikroskopie unter Verwendung monospezifischer Tubulin-Antikörper wurden parallel an mit Glutaraldehyd fixierten Gewebekulturzellen ohne Osmiumfixierung durchgeführt. Um die überschüssigen Aldehydgruppen der stark vernetzten zellulären Matrix zu reduzieren, die normalerweise die nachfolgende Immunfluoreszenzmikroskopie stören, wurde eine milde NaBH(4)-Behandlung während oder nach den Dehydrationsschritten eingeführt. Zellen, die den NaBH(4)-Schritt durchlaufen haben, zeigen in der Transmissionselektronenmikroskopie normale zytoplasmatische Mikrotubuli mit einem Durchmesser von etwa 250 A. Wenn solche Zellen der indirekten Immunfluoreszenzmikroskopie unter Verwendung eines monospezifischen Tubulin-Antikörpers unterzogen werden, zeigen sie ein komplexes System von ununterbrochenen, feinen, fluoreszierenden Fasern, die das Zytoplasma zwischen dem perinukleären Raum und der Plasmamembran durchqueren. Dünne Schnitte von Zellen, die dem indirekten Immunfluoreszenzverfahren unterzogen wurden, zeigen mit Antikörpern dekorierte Mikrotubuli mit einem Durchmesser von etwa 600 A. Diese Dekoration wird nicht erzielt, wenn nicht-immune IgGs anstelle von monospezifischen Antitubulin-IgGs verwendet werden. Somit kann ein direkter Vergleich von zytoplasmatischen Mikrotubuli in mit Glutaraldehyd fixierten Zellen sowohl durch Elektronenmikroskopie als auch durch Immunfluoreszenzmikroskopie erhalten werden.