Ein verbessertes monomeres blaues fluoreszierendes Protein mit hoher chemischer Stabilität des Chromophors

Allgemein verwendete monomere blaue fluoreszierende Proteine leiden unter einer moderaten Helligkeit. Das hellste von ihnen, mTagBFP, hat eine bemerkenswert niedrige chemische Stabilität über die Zeit. Eine verlängerte Inkubation von mTagBFP führt zu seinem Übergang von einem blauen fluoreszierenden Zustand mit einer Absorption bei 401 nm zu einem nicht fluoreszierenden Zustand mit einer Absorption bei 330 nm. Hier haben wir die chemische Struktur des abgebauten Produkts des blauen mTagBFP-ähnlichen Chromophors bestimmt. Auf der Basis von mTagBFP haben wir eine verbesserte Variante entwickelt, die mTagBFP2 genannt wird. mTagBFP2 weist eine 2-fach höhere chemische Stabilität und wesentlich höhere Helligkeit in lebenden Zellen auf als mTagBFP. mTagBFP2 ist auch 1,2-fach und 1,7-fach photostabiler als mTagBFP in Weitfeld- bzw. konfokalen Mikroskopie-Anordnungen. mTagBFP2 behält alle anderen vorteilhaften Eigenschaften des elterlichen mTagBFP bei, einschließlich der hohen pH-Stabilität und der schnellen Bildung des Chromophors. Die verbesserte Photostabilität und chemische Stabilität des Chromophors von mTagBFP2 machen es zu einem überlegenen Protein-Tag. mTagBFP2 schneidet bei zahlreichen Protein-Fusionen gut ab und übertrifft mTagBFP als Donor in der Förster-Resonanz-Energieübertragung mit mehreren grünen fluoreszierenden Protein-Akzeptoren.