Luciferase-Komplementationstest für Protein-Protein-Interaktionen in Pflanzen

Konstitutive und dynamische Protein-Protein-Interaktionen sind grundlegend für alle Aspekte zellulärer Prozesse. Im Vergleich zu anderen Techniken zur Messung von Protein-Protein-Interaktionen in Pflanzen hat der Luciferase-Komplementationstest eine Reihe von Vorteilen: Er detektiert Protein-Protein-Interaktionen in Pflanzen in Echtzeit, erfordert nur wenig manuelle Handhabung der Proben, ist hochgradig quantitativ, hat extrem niedrige Hintergrundwerte und kann leicht für Hochdurchsatz-Interaktomstudien hochskaliert werden. Hier beschreiben wir ein Protokoll, das zwei alternative Datenerfassungsmethoden zur Quantifizierung der Lumineszenz-Ergebnisse basierend auf Agrobacterium-vermittelter transienter Luciferase-Expression in Nicotiana benthamiana umfasst. Eine Datenerfassungsmethode verwendet ein bildgebendes System mit einem Ladegekopplten Bauelement, das es ermöglicht, die Interaktionen als Bilder darzustellen, und die andere verwendet ein Luminometer, das es ermöglicht, den Test in einer 96-Well-Platte durchzuführen. Technische Parameter, die sich auf häufig auftretende Probleme und häufige Fehler beziehen, die hier präsentiert werden, sind wichtig, um diesen Test erfolgreich durchzuführen. © 2018 by John Wiley & Sons, Inc.