Protocolo para avaliar bioenergética e uso de combustíveis mitocondriais em imunócitos auto-reativos murinos usando o Analisador de Fluxo Extracelular Seahorse

O metabolismo eficiente, ou os meios pelos quais as células produzem recursos energéticos, é crítico para a função efetora adequada. Aqui, apresentamos um protocolo para examinar a bioenergética e a utilização de combustíveis mitocondriais de imunócitos auto-reativos murinos primários utilizando drogas que modulam o metabolismo celular. Descrevemos etapas para calibração de placas, isolamento de imunócitos primários e preparação de placas para ensaio Seahorse. Em seguida, detalhamos os procedimentos para realizar o Teste de Estresse Mitocondrial XF, seguidos de cálculos de bioenergética e estatísticas. Para detalhes completos sobre o uso e execução deste protocolo, consulte Wilson et al.