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Dans le domaine de la biologie synthétique, les chassis microbiens, y compris la levure Saccharomyces cerevisiae, sont progressivement ingénierés avec une complexité et une échelle croissantes. Des outils d'ingénierie génétique en laboratoire humide sont développés et optimisés pour faciliter la construction de souches, mais sont souvent incompatibles entre eux en raison d'éléments régulateurs partagés, tels que le promoteur inductible par le galactose (GAL) dans S. cerevisiae. Ici, nous avons prototypé les cassures de l’ADN double brin (DSBs) médiées par I-SceI induites par la cyanamide pour le recyclage de marqueurs sélectionnables dans l'ingénierie métabolique des levures. Nous avons en outre combiné les DSB induites par la cyanamide médiées par I-SceI et la sélection négative médiée par MazF induite par le maltose pour le remplacement in situ de promoteurs sans plasmide, ce qui a simplifié la procédure de clonage moléculaire pour la caractérisation des promoteurs dans S. cerevisiae. Nous avons ensuite caractérisé trois promoteurs inductibles par tétracycline de force différentielle, un promoteur inductible par β-estradiol non-fuyard, le promoteur DDI2 inductible par la cyanamide, les promoteurs bidirectionnels MAL32/MAL31, et cinq paires de promoteurs bidirectionnels GAL1/GAL10. Dans l'ensemble, des contrôles régulatoires alternatifs pour les outils d'ingénierie génomique sont importants pour la construction de génotypes complexes dans des systèmes microbiens pour des applications de biologie synthétique et d'ingénierie métabolique.
McDonnell et al. (Mercredi,) ont étudié cette question.