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Resumo A proteína verde fluorescente tem sido há muito tempo uma proteína favorita para demonstrar a purificação de proteínas no curso de laboratório de bioquímica. A cor verde vívida da proteína ajuda a demonstrar aos alunos os conceitos por trás da cromatografia de afinidade ou troca iônica. Projetamos uma série de laboratórios introdutórios de bioquímica utilizando uma proteína verde termostável (TGP‐E) projetada para ter uma termostabilidade incomumente alta. Essa proteína permite que os alunos avancem na purificação e caracterização sem a necessidade de manter as amostras de proteína sobre gelo. A série de laboratórios de 5 semanas começa com uma introdução às técnicas de biologia molecular durante as semanas 1 e 2, onde a mutagênese dirigida por sítio é utilizada para introduzir uma única mudança de nucleotídeo que desloca o espectro fluorescente do TGP‐E para ciano (CTP‐E) ou amarelo (YTP‐E). Os alunos identificam a reação de mutagênese bem-sucedida pela cor de uma pequena amostra de expressão após indução com IPTG. Em seguida, os alunos purificam a proteína TGP‐E (controle—tipicamente um grupo se oferece como voluntário), YTP‐E ou CTP‐E em um laboratório de 1 semana. Durante o laboratório da semana seguinte, os alunos realizam SDS‐PAGE para verificar a pureza da proteína, ensaio de ácido bicinchonínico para quantificar o rendimento da proteína, e espectros de absorbância e fluorescência para caracterizar o caráter fluorescente de sua proteína. O laboratório final da série investiga a termostabilidade do YTP‐E e CTP‐E em comparação com TGP‐E usando um leitor de placas de fluorescência. Esta série de experimentos de 5 semanas proporciona aos alunos experiência em várias técnicas-chave de bioquímica e permite que eles comparem as propriedades das mutações. Ao final do curso, os alunos escreverão um relatório de pesquisa e farão uma breve apresentação sobre seus resultados.
Anderson et al. (Sat,) estudaram esta questão.