Um ensaio de deslocamento de mobilidade eletroforética usando a proteína isolada de plantas hospedeiras

Resumo Contexto O ensaio de deslocamento de mobilidade eletroforética (EMSA) é uma tecnologia comum para detectar interações DNA-proteína. No entanto, na maioria dos casos, a proteína usada no EMSA é obtida por meio de expressão procariótica e raramente de plantas. Ao mesmo tempo, as proteínas expressas a partir de sistemas procariotos geralmente não conseguem se dobrar de forma natural e não possuem modificações pós-traducionais, o que pode afetar a ligação das proteínas ao DNA. Resultados Aqui, desenvolvemos uma técnica para isolar rapidamente proteínas de interesse de plantas hospedeiras e, em seguida, analisá-las usando EMSA fluorescente. Este sistema de tecnologia é chamado: método PPF-EMSA (proteína de plantas EMSA fluorescente). No PPF-EMSA, um método de transformação transitória especial é empregado para entregar transientemente genes na planta, permitindo a síntese eficiente das proteínas codificadas. Então, a proteína-alvo é isolada usando imunoprecipitação, e as sondas de DNA foram marcadas com cianina 3 (Cy3). Tanto o EMSA fluorescente quanto o EMSA fluorescente superdeslocado podem ser realizados usando as proteínas de plantas. Três tipos de plantas, Betula platyphylla, Populus davidiana × P. bolleana e Arabidopsis thaliana, são usados neste estudo. As proteínas isoladas de plantas estão em um estado natural, conseguem se dobrar naturalmente e estão modificadas pós-traducionalmente, permitindo uma verdadeira ligação aos seus DNAs cognatos. Conclusão Como a transformação transitória pode ser realizada rapidamente e não depende da disponibilidade de transformação estável, acreditamos que este método terá uma ampla aplicação, permitindo a isolação de proteínas de plantas hospedeiras de forma conveniente.