Domínios Hinge e Transmembrana do Receptor de Antígeno Quimérico Regulam a Expressão do Receptor e o Limite de Sinalização

As células T com receptor de antígeno quimérico (CAR-T) demonstraram um potencial clínico significativo; no entanto, sua forte atividade antitumoral pode causar efeitos adversos graves. Para garantir a eficácia e a terapia segura com células CAR-T, é importante entender a relação estrutura–atividade do CAR. Para esclarecer o papel dos domínios hinge e transmembrana na função do CAR e das células CAR-T, geramos diferentes quimeras e analisamos seus níveis de expressão e atividade específica contra antígenos nas células CAR-T. Primeiro, criamos um CAR básico com domínios hinge, transmembrana e de transdução de sinal derivados de CD3ζ, depois geramos seis variantes de CAR cujos domínios hinge ou hinge/transmembrana se originaram de CD4, CD8α e CD28. O nível de expressão do CAR e a estabilidade na célula T foram grandemente afetados pelo domínio transmembrana, em vez do domínio hinge. As funções específicas contra antígenos da maioria das células CAR-T dependeram dos níveis de expressão do CAR. No entanto, os CARs com um domínio hinge derivado de CD8α ou CD28 mostraram diferenças significativas na função das células CAR-T, apesar de seus níveis de expressão iguais. Esses resultados sugerem que a intensidade de sinalização do CAR nas células T foi afetada não apenas pelo nível de expressão do CAR, mas também pelo domínio hinge. Nossas descobertas indicam que o domínio hinge regula o limite de sinalização do CAR e o domínio transmembrana regula a quantidade de sinalização do CAR por meio do controle do nível de expressão do CAR.