O estudo demonstra a produção bem-sucedida de transcritos de RNA infecciosos a partir de clones de cDNA do vírus Sindbis, permitindo o mapeamento preciso e a geração de mutantes virais definidos.
Construímos clones de cDNA de comprimento total do vírus Sindbis que podem ser transcritos in vitro pela RNA polimerase SP6 para produzir transcritos infecciosos de comprimento do genoma. Os vírus produzidos a partir de transcritos in vitro são idênticos ao vírus Sindbis e apresentam fenótipos específicos de cepa que refletem a fonte de RNA utilizada para a síntese de cDNA. Os clones de cDNA foram usados para confirmar o mapeamento da mutação causal do ts2 para a proteína da cápsula. Uma estratégia geral para o mapeamento de mutações do vírus Sindbis é descrita e foi usada para identificar duas mutações letais em uma construção original de comprimento total que não produziu transcritos infecciosos. Um conector XbaI foi inserido no clone de cDNA próximo ao início da transcrição do mRNA subgenômico; o vírus resultante mantém a sequência de reconhecimento XbaI, fornecendo assim evidências formais de que os vírus são derivados de transcritos in vitro de clones de cDNA. As potenciais aplicações dos clones de cDNA são discutidas.
Rice et al. (Ter,) estudaram essa questão.