从Sindbis virus cDNA克隆制备具有感染性的RNA转录本：致死突变定位、温度敏感标记拯救及体外诱变产生特定突变体

我们构建了Sindbis virus的全长cDNA克隆，该克隆可被SP6 RNA polymerase在体外转录以产生具有感染性的全长基因组转录本。由体外转录本产生的病毒与Sindbis virus相同，并表现出反映用于cDNA合成的RNA来源的毒株特异性表型。该cDNA克隆被用于证实ts2致病突变定位于衣壳蛋白。本文描述了一种定位Sindbis virus突变的通用策略，并用其鉴定了一个最初未能产生感染性转录本的全长构建体中的两个致死突变。在亚基因组mRNA转录起始位点附近的cDNA克隆中插入了一个XbaI接头；由此产生的病毒保留了XbaI识别序列，从而为病毒源自cDNA克隆的体外转录本提供了正式证据。讨论了该cDNA克隆的潜在应用。