Clonagem molecular e expressão de um ativador induzível por gama-interferon da protease multicatalítica.

A protease multicatalítica (MCP) pode ser ativada por dois complexos multisubunitários distintos. Um é o componente regulatório da protease 26 S, que contém pelo menos 15 subunidades distintas. O outro é um ativador hexamérico composto por subunidades de 31 e 29 kDa. Um cDNA para a subunidade menor foi clonado e sequenciado. O cDNA codifica uma proteína de 249 aminoácidos. Embutido entre sequências típicas de domínios de proteínas globulares está um trecho de 28 resíduos de lisina e ácido glutâmico "alternados". Regiões semelhantes, que chamamos de motivos KEKE, também são encontradas em duas subunidades de MCP, na subunidade 12 da protease 26 S e em uma variedade de chapereoninas, incluindo hsp90, hsp70 e calnexina. A expressão do cDNA do ativador em Escherichia coli produziu uma proteína funcional virtualmente indistinguível do ativador de MCP purificado diretamente de glóbulos vermelhos. A proteína recombinante formou três espécies isoelétricas em eletroforese em gel bidimensional de poliacrilamida, e reagiu com anticorpos contra o ativador de glóbulos vermelhos. O ativador recombinante também ligou a protease multicatalítica e estimulou o clivagem no terminus carboxílico de resíduos hidrofóbicos ou carregados. A síntese da subunidade ativadora foi induzida pelo tratamento com gama interferon de células HeLa. Essas duas últimas descobertas têm implicações para a apresentação de antígenos pelos receptores de histocompatibilidade maior classe I.