全基因组 CRISPR/Cas9 筛选鉴定出 SLC39A9 和 PIK3C3 是埃博拉病毒感染的关键进入因子

埃博拉病毒（EBOV）已成为全球重大的健康隐患，尤其是在2013–2016年西非暴发期间。尽管已有两种 EBOV 抗体药物获得临床批准，但迫切需要更多样化且有效的抗病毒药物，并对病毒与宿主的相互作用有全面的认识。在本研究中，我们利用一种能够重现整个病毒生命周期的生物遏制性 EBOVΔVP30-EGFP 细胞培养模型，进行了全基因组 CRISPR/Cas9 筛选。通过该筛选，我们鉴定出 PIK3C3（磷脂酰肌醇3-激酶）和 SLC39A9（锌转运蛋白）为 EBOV 感染的关键宿主因子。SLC39A9 和 PIK3C3 的基因缺失导致 EBOV 进入减少，但不影响病毒基因组复制，这表明 SLC39A9 和 PIK3C3 作为进入因子，促进病毒进入宿主细胞。此外，PIK3C3 激酶活性对 EBOV 病毒粒子的内化是必不可少的，推测是通过调节内吞和自噬膜转运实现的，而此前已公认这一过程对 EBOV 内化至关重要。值得注意的是，我们的研究表明 PIK3C3 激酶抑制剂能够有效阻断 EBOV 感染，凸显了 PIK3C3 是一个极具前景的药物靶点。此外，生化分析显示重组 SLC39A9 蛋白可以直接结合病毒 GP 蛋白，从而进一步促进病毒 GP 蛋白与细胞受体 NPC1 的相互作用。这些发现提示 SLC39A9 在 EBOV 进入过程中发挥双重作用。最初，它在早期进入阶段通过与病毒 GP 蛋白结合而作为附着因子。随后，在病毒 GP 被组织蛋白酶裂解之前，SLC39A9 在晚期进入阶段充当衔接蛋白，促进病毒粒子与 NPC1 受体之间的相互作用。综上所述，本研究为病毒-宿主相互作用提供了新的见解，为开发针对 EBOV 感染的新疗法贡献了宝贵信息。