BCL6B依赖的ETV2抑制影响内皮细胞分化

摘要背景 B细胞慢性淋巴细胞白血病/淋巴瘤6成员B（BCL6B）作为一种序列特异性的转录抑制因子在细胞核内发挥作用，参与多种生物功能，包括肿瘤抑制、免疫反应、干细胞自我更新和血管生成。然而，BCL6B是否参与内皮细胞（EC）发育仍然 largely unknown。ETS变体转录因子2（ETV2）以促进EC分化而闻名。本研究旨在确定BCL6B在EC分化中的重要作用及其潜在机制。方法 建立了显示BCL6B过表达或BCL6B敲低的人诱导多能干细胞（hiPSC）系，并使其分化为EC和血管类器官（VO）。进行了RNA测序分析，以确定BCL6B在从hiPSC向EC分化过程中调控的潜在信号通路。采用定量实时PCR（qRT-PCR）检测多能性和血管特异性标记基因的表达。通过流式细胞术分析确定EC分化效率。通过体外管状结构形成实验评估EC的功能。使用免疫荧光分析或西方印迹法评估蛋白质表达和类血管结构。利用荧光素酶报告基因检测和染色质免疫沉淀（ChIP）-PCR分析确定BCL6B与ETV2之间的调控关系。结果 成功从hiPSC生成功能性EC和VO。值得注意的是，BCL6B的过表达抑制了hiPSC的EC分化，而BCL6B的敲低则改善了这一过程。此外，BCL6B的过表达减弱了来源hiPSC-EC形成管状结构的能力。此外，与对照VO相比，BCL6B过表达抑制了VO的生长，而BCL6B敲低对VO的大小影响不大。RNA测序分析证实我们的分化方案导致了细胞/组织/系统发育过程，特别是血管发育和管道形态发生的景观变化，且这些变化显著受到BCL6B的调控。后续实验确认了BCL6B的抑制效应是通过BCL6B与ETV2启动子区域结合来实现的，这导致ETV2转录活性的抑制。重要的是，BCL6B过表达对hiPSC分化为EC的抑制效应可以通过ETV2过表达得到拯救。结论 BCL6B通过抑制ETV2的转录活性抑制EC分化并阻碍VO发育。