MARCH1通过泛素化TBK1负向调节TBK1-mTOR信号通路

摘要 背景 TBK1通过磷酸化mTOR积极调节生长因子介导的mTOR信号通路。然而，TBK1-mTOR信号通路如何被调节仍不清楚。考虑到STING不仅与TBK1相互作用，还与MARCH1相互作用，我们推测MARCH1可能通过靶向TBK1来调节mTOR信号通路。本研究的目的是确定MARCH1是否通过靶向TBK1来调节mTOR信号通路。方法 使用共免疫沉淀（Co-IP）实验验证MARCH1与STING或TBK1之间的相互作用。通过变性共免疫沉淀分析STING或TBK1的泛素化。通过Western blotting确定在共免疫沉淀或变性共免疫沉淀样品中检测到的蛋白质水平。通过感染承载相关shRNA序列的慢病毒构建稳定敲低细胞。利用划痕伤口愈合和克隆形成细胞存活实验检测乳腺癌细胞的迁移和增殖。结果 我们表明MARCH1在生长因子诱导的TBK1-mTOR信号通路中起重要作用。MARCH1过表达减弱了生长因子诱导的mTOR信号通路的激活，而其缺失则导致相反的效果。在机制上，MARCH1与TBK1相互作用并促进TBK1的K63连接的泛素化。这种TBK1的泛素化减弱了其与mTOR的相互作用，从而抑制生长因子诱导的mTOR信号通路。重要的是，由MARCH1缺失诱导的快速增殖被mTOR、STING或TBK1抑制所削弱。结论 MARCH1通过靶向STING-TBK1-mTOR轴抑制生长因子介导的mTOR信号通路。