25-羟基维生素D商业试剂盒中的问题及简单、稳健和快速的HPLC方法的发展

摘要 维生素D是一种脂溶性化合物，在骨矿物质代谢中发挥关键作用。目前的商业试剂盒和几种已发布的检测方法（高效液相色谱（HPLC）和免疫测定）由于使用多种试剂、较大的样品体积、高反压、较长的提取时间、提取后氮气蒸发、显著的干扰和抗体交叉反应而显得复杂。本文报告了一种用于测定25-羟基维生素D2（25-OHD2）和25-羟基维生素D3（25-OHD3）的新HPLC方法，该方法简单（无需蒸发）、快速（10分钟运行时间）且稳健。血清样品（300 μl）与含有洛拉酮作为内标的300 μl乙腈混合。在涡旋和离心后，上清液被加载到C18提取柱中，用70%甲醇洗涤，然后用200 μl的70%乙醇和30%异丙醇（IPA）混合物洗脱。洗脱液与50 μl水混合并注入HPLC-UV系统进行分析。该方法在25-OHD2和25-OHD3的浓度范围为10-750 nmol/L内证明线性。对于这两种化合物，在四种不同浓度下，方法的内部和外部精密度均小于10。该方法与（LC–MS/MS）进行了比较，25-OHD2和25-OHD3的相关系数（R2）分别为0.9454和0.9673。所提出的HPLC方法简单、快速、稳健，且没有商业试剂盒中最常见的问题。它可以用于高容量实验室，使用HPLC方法同时测定血清样品中的25-OHD2和25-OHD3。