通过CRISPR/Cas9基因组编辑对葡萄树MLO基因的功能特征进行分析，以确定其在白粉病易感性中的作用

植物中白粉病（PM）的成功感染依赖于霉菌抗性位点O（MLO）基因，这些基因编码对真菌穿透至关重要的易感性因子。在拟南芥中，三种V类MLO基因（AtMLO2、6和12）的功能丧失突变赋予了对PM感染的完全抵抗力。从那时起，旨在发现许多物种中与PM易感性相关的MLO基因，以引入基于mlo的PM抗性。以前在番茄和葡萄中使用RNAi方法的研究，将PM易感性归因于SlMLO1、5和8以及VvMLO3、13和17，表明MLO之间可能存在功能冗余。在这里，我们通过CRISPR/Cas9介导的突变在微葡萄模型中干扰了最近的葡萄近亲VvMLO3、4、13和17，以识别候选MLO基因，从而引入基于mlo的PM抗性。单个突变体mlo3、mlo4、mlo13和mlo17对E. necator表现出8%到50%的低感染率，而双重突变体mlo3/4、mlo3/13和mlo13/17以及三重突变体mlo3/13/17表现出60%到90%的低感染率。但四重突变体mlo3/4/13/17植物几乎表现出完全的PM抗性。由于单个导向RNA的编辑效率差异，在三重和四重突变体之间观察到克隆的抗性水平存在相当大的差异。一些突变体在生长和发育中表现出多效性效应，从早老和生长受阻到非开花表型，这似乎也与植物中基因编辑细胞的百分比有关。总体目标是使用CRISPR核糖核蛋白从突变体中切除基因组整合的T-DNA盒，以实现无转基因的PM抗性。