后GEM–RT清理和cDNA扩增v1

铬单细胞基因表达解决方案升级短读序列仪，提供可扩展的微流体平台，通过对每个样本中的500-10,000个单个细胞进行3’数字基因表达分析。对约3,500,000个10x条形码进行单独采样，以索引每个细胞的转录组。方法是将数千个细胞（或细胞核）分隔到纳升规模的乳液中的凝胶珠（GEMs）中，所有生成的cDNA共享一个共同的10x条形码。生成双重索引的文库并从cDNA中测序，10x条形码用于将单个读取与单个分隔重新关联。在GEMs生成和条形码处理后，GEMs被破坏并回收分馏物。使用硅烷磁珠从后GEM-RT反应混合物中纯化第一链cDNA，该混合物包括剩余的生化试剂和引物。通过PCR扩增带条形码的全长cDNA，以产生足够的质量用于文库构建。本协议详细介绍了后GEM-RT清理和cDNA扩增、清理-SPRIselect和定量。