CRISPR 筛选鉴定 RNA 结合蛋白 Eef1a1 作为肌肉发生的关键调节因子

骨骼肌肌肉发生依赖于基因调控，由分子机制精细协调。虽然转录因子和非编码 RNA 在肌肉发生中的作用是广为人知的，但 RNA 结合蛋白（RBP）的贡献直到现在仍不明确。因此，为了研究转录后调节因子在肌肉发生中的功能，并揭示调节肌肉发生的新功能 RBP，我们采用了 CRISPR 高通量 RBP-KO（RBP 全面敲除）文库筛选。通过这种方法，我们成功地鉴定了 Eef1a1 作为肌肉发生中的新调节因子。使用 CRISPR 敲除（CRISPRko）和 CRISPR 干扰（CRISPRi）技术，我们成功建立了 CRISPRko 和 CRISPRi 的细胞模型。我们的发现表明 Eef1a1 在促进 C2C12 成肌细胞增殖中发挥关键作用。通过 siRNA 抑制和过表达的方法，我们进一步阐明了 Eef1a1 在促进增殖和抑制分化过程中的参与。RIP（RNA 免疫沉淀）、miRNA pull-down 和双荧光素酶报告实验确认 miR-133a-3p 直接靶向 Eef1a1。共转染实验表明，miR-133a-3p 可以拯救 Eef1a1 对 C2C12 成肌细胞的影响。总而言之，我们的研究利用 CRISPR 文库高通量筛选揭示了一个新型 RBP Eef1a1，参与调节肌肉发生。Eef1a1 促进成肌细胞的增殖，同时抑制分化过程。此外，它还作为 miR-133a-3p 的拮抗因子，从而调节肌肉发生的过程。