摘要2130 使用基因编辑和转化相关重组（TAR）克隆在酿酒酵母中构建合成分枝杆菌噬菌体基因组

致病细菌中抗生素耐药性的上升正在引发对噬菌体的新关注。这些自然存在的抗微生物剂可以潜在地被开发为新型治疗剂。然而，现有的限制如细菌抵抗力和狭窄的宿主范围是问题所在。基因组科学和合成生物学中新技术的出现提供了构建独特噬菌体基因组的机制，这些基因组赋予新功能，可能克服这些困难。最近，一种酵母菌株被工程化，拥有超过50%的合成DNA，并在6条染色体上进行了编辑。基于约翰霍普金斯大学的构建基因组课程和合成酵母项目（www.syntheticyeast.org）中开发的方法，我们展示了合成分枝杆菌噬菌体Giles基因组的构建。通过组装和编辑提供了合成噬菌体基因组可以生成的概念证据。使用现有的噬菌体基因组编辑技术，采用Oldfield等人在2017年提出的新型组装线方法，我们着手构建包含12个重叠DNA片段的完整基因组，适应于电击转染DNA（BRED）和基于酵母的转化相关重组（TAR）系统。通过聚合酶链反应（PCR）将单独的DNA小片段通过设计特定的引物与TAR克隆载体结合。独特的噬菌体DNA片段经过非必需基因的删除或功能增强基因的插入，然后组装成完整长度的噬菌体基因组。该项目的最终目标是将合成的噬菌体转化为细菌细胞并测量其感染性。本项目的结果将显示一个成功工程化并具有感染能力的Giles噬菌体克隆，其重要性在于展示了构建合成噬菌体基因组的新方法的优化。国家科学基金会本科生研究经历（REU）：合成生物学中的REU