最近在DNA合成和测序方面的发展使得构建全面的基因变异文库以及进行功能分析成为可能。对于长基因而言,实现高复制能力和彻底的突变特征分析在技术和经济上仍然是一个挑战。在这里,我们开发了一种高效、经济且可扩展的文库构建方法,该方法依赖于低成本的DNA合成和标准克隆技术,旨在提高突变研究的可及性并推进蛋白质科学领域的发展。在合成过程中,每个简并密码子变体与多个DNA条形码物理关联,这克服了将变体与条形码连接所需的长读取测序的需求。我们通过为PDR1构建完整的文库来演示我们方法的可扩展性,PDR1是酵母(Saccharomyces cerevisiae)中编码多重转录因子的3.2 kb多药耐药基因。在通过条形码测序和直接测序突变编码序列时,我们在测量氨基酸变体影响时展示了近乎完美的对应关系.
Jann等人(周二)研究了这个问题.