光谱单分子定位显微镜（sSMLM）提供了来自单个发射体的空间和光谱信息，但其更广泛的应用受到两个关键因素的限制：单一荧光染料的光子预算有限和单分子荧光光谱异质性的存在（smFLUSH）。DNA-PAINT通过瞬时结合不断补充荧光染料，为定位和光谱读出确保可持续的光子供应，提供了独特的解决方案。然而，为了实现可靠的多重分析，必须对染料的smFLUSH进行统计量化。在这里，我们提出了一个双色光谱DNA-PAINT框架，结合了红色通道染料的smFLUSH特征，以指导染料选择和光谱分离。我们展示了smFLUSH限制了在特定光谱通道内可区分探针的数量，并量化了这些变化，涵盖不同的环境，包括纳米标尺和细胞目标。最后，我们展示了在细胞中进行的双色光谱DNA-PAINT成像，与传统的顺序采集相比，实现了更好的光谱精度和多重分析性能。我们的结果突显了DNA-PAINT作为克服sSMLM中光子预算限制的有效方法，而smFLUSH特征提供了一条通向光子高效、多重超分辨率成像复杂生物系统的途径。
Shahid等（Sun）研究了这个问题。