快速基因鉴定和定位几种隐球菌物种的酶促扩增核糖体DNA

对许多样本的详细限制分析通常需要大量的时间和精力用于DNA提取、限制性消化、南方杂交和杂交。我们描述了一种新方法，使用聚合酶链反应（PCR）快速简化限制性分型和绘制来自多个不同分离株的DNA。长度可达2千碱基对的DNA片段从几种致病性隐球菌种（包括C. neoformans、C. albidus、C. laurentii和C. uniguttulatus）的粗糙DNA样本中高效扩增。使用频繁切割的限制性酶对PCR产物进行消化和电泳产生了复杂的限制性表型（指纹），通常对于每个菌株或物种都是独特的。我们使用PCR扩增和分析这几种真菌的核糖体DNA（rDNA）重复序列中三个主要部分的限制模式变异。通过对共用一个引物位点的一系列逐渐增大的PCR片段进行指纹分析，确定了rDNA基因位点内许多限制位点的详细图谱。根据PCR指纹判断，19个C. neoformans分离株在我们调查的四种限制性酶下没有变异。其他隐球菌物种在其rDNA中显示出不同程度的限制模式变异，并被证明与C. neoformans在遗传上是不同的。本研究中使用的PCR引物也已成功应用于扩增来自其他致病性和非致病性真菌（包括念珠菌属）的rDNA，并应在临床检测和其他研究中具有广泛的适用性。