成脂分化前后释放的脂肪细胞来源细胞外囊泡的特征分析

细胞外囊泡（EVs）是由包括脂肪细胞在内的多种细胞类型释放的亚微米级囊泡。尽管脂肪细胞来源的 EVs 的特征尚未得到充分描述，但 EVs 已被证实参与了肥胖驱动的心血管疾病的发病机制。我们旨在明确成脂分化前后脂肪细胞来源 EVs 的特征，并假设成脂分化会影响 EV 的结构、分子组成和功能。使用 3T3-L1 细胞，在分化第 0 天和第 15 天收集 EVs。通过电子显微镜观察 EV 和细胞制备物，并通过纳米颗粒跟踪分析（NTA）对 EVs 进行定量。随后，利用流式细胞术评估 EVs 的膜联蛋白 V（annexin V）阳性率；利用二维薄层色谱法和气相色谱法评估脂质和磷脂组成；并通过免疫表型分析检测囊泡蛋白含量。成脂前细胞通过突起网络相连，且两个时间点的 EVs 均表现出经典的 EV 形态。成脂分化前 EV 浓度升高，特别是在外泌体和小微囊泡中。亲代细胞含有更高比例的磷脂酰丝氨酸（PS），并表现出更高的 annexin V 结合力。在第 0 天，细胞和 EVs 均含有更高比例的花生四烯酸。PREF-1 在第 0 天升高，而脂联素在第 15 天更高，表明 EV 蛋白含量反映了细胞的成脂分化阶段。我们的数据表明，细胞在成脂分化前的 EV 产量更高，特别是直径 <300 nm 的囊泡。该时间点的细胞具有更高比例的 PS（EV 生成所需），而相应的 EVs 则富含信号脂肪酸（如花生四烯酸）和成脂标志物（如 PREF-1 和 PPARγ）。