小RNA在果蝇昼夜节律中的作用

关于翻译控制对昼夜节律的贡献知之甚少。为了解决这个问题，特别是微小RNA（miRNAs）的翻译控制，我们在果蝇昼夜节律组织中抑制了miRNA生物合成途径。与昼夜调节转录的增加相结合，这严重影响了果蝇的行为节律，表明miRNAs在昼夜计时中起作用。为了识别对这种调控重要的miRNA-mRNA对，AGO1免疫沉淀结合微阵列分析鉴定了在miRNA调控下的mRNAs。它们包括三个核心钟基因mRNAs——时钟基因（clk）、vrille（vri）和clockworkorange（cwo）。为了识别参与昼夜计时的miRNAs，我们利用昼夜细胞特异性抑制miRNA生物合成途径，随后进行铺砖阵列分析。该方法鉴定了在果蝇头部昼夜组织中表达的miRNAs。行为和分子实验表明，这些miRNAs之一，即发育调节因子bantam，在核心昼夜节律节律器中发挥作用。S2细胞生化实验证明，bantam通过与位于clk 3'非翻译区（UTR）内的三个靶点位点结合来调节clk的翻译。此外，含有突变bantam位点的clk转基因在其3' UTR中，对clk突变果蝇的节律恢复有效性远低于野生型CLK转基因。