细胞内季铵对 BK 通道的状态非依赖性阻滞

季铵（QA）分子对许多钾通道的细胞内阻滞具有状态依赖性，宏观记录中阻滞的时间依赖性成分证实了通道开放的必要性。然而，Ca(2+) 和电压激活的钾（BK）通道是否也是如此仍不清楚。先前的研究（Li, W., and R.W. Aldrich. 2004. J. Gen. Physiol. 124:43-57）初步提出了状态依赖性的捕获模型，但保留了状态非依赖性阻滞的可能性。在此，我们发现一种新型 QA 衍生物 bbTBA 对 BK 通道的阻滞具有时间依赖性，这提出了状态依赖性开放通道阻滞的可能性。或者，观察到的阻滞电压依赖性可能足以解释时间依赖性阻滞。我们使用 bbTBA 阻滞的稳态和动力学测量来区分这两种可能性。bbTBA 在 -200 至 -100 mV 的电位下未显著减慢失活（deactivation）动力学，表明通道关闭不受结合的 bbTBA 阻碍。我们进一步未发现 bbTBA 在关闭后被捕获在 BK 通道内的证据。在 +40 mV 下对稳态分数阻滞的测量显示，P(o) 发生 33 倍的变化仅导致表观亲和力发生 1.3 倍的变化，这与状态依赖性阻滞所预测的 31 倍变化形成了鲜明对比。最后，高浓度下 bbTBA 阻滞出现第三个动力学成分与状态依赖性阻滞不相容。我们的结果表明，细胞内 bbTBA 进入 BK 通道腔并不严格受通道开闭的门控，并提示 BK 通道的通透门可能并非位于细胞内。