用甲基-β-环糊精提取胆固醇扰动夹 coats 内吞囊泡的形成

通过使用甲基-beta-环糊精（MbetaCD）选择性地从质膜中提取胆固醇，研究了胆固醇对内吞作用的重要性，涉及HEp-2及其他细胞系。MbetaCD处理强烈抑制了转铁蛋白和EGF的内吞，而蓖麻毒素的内吞受影响较小。转铁蛋白内吞的抑制完全可逆。在去除MbetaCD后，即使在无血清培养基中，通过持续培养细胞它也得以恢复。在无血清培养基中，添加洛伐他汀（防止胆固醇合成）会抑制恢复，但当同时与洛伐他汀添加水溶性胆固醇形式时，内吞则恢复。对MbetaCD处理的HEp-2细胞进行电子显微镜研究显示，典型的内凹小凹体不再存在。此外，夹 coats 皮囊的内凹被强烈抑制，导致浅表的夹 coats 皮囊的积累。定量免疫金标记显示，在MbetaCD处理后的夹 coats 皮囊中，转铁蛋白受体的浓度与对照细胞相同（约为七倍）。因此，我们的结果表明，虽然去除胆固醇后夹 coats（和内凹小凹体无关）的内吞仍然在进行，但胆固醇对夹 coats 内吞囊泡的形成是必不可少的。