三参数T细胞报告线中共刺激和共抑制的评估：NF-κB、NFAT和AP-1的同时测量

T细胞受体复合物的结合重编程T细胞，使其进行增殖、细胞因子生产和向效应细胞分化。这个过程依赖于激活的共刺激信号，并受到共抑制分子的反制。三个转录因子，即NF-κB、NFAT和AP-1，在诱导T细胞激活和分化所需的转录程序中发挥着重要作用。在这里，我们描述了基于人类Jurkat T细胞系生成的三参数报告器，其中NF-κB、NFAT和AP-1的反应元件分别驱动荧光蛋白CFP、eGFP和mCherry的表达。这些蛋白的发射光谱使得能够同时评估NF-κB、NFAT和AP-1在刺激响应中的活性。TCR复合物的结合诱导了中等的报告活性，而在共刺激受体CD2或CD28的共同结合下，这种活性得到了显著增强。此外，我们生成并测试了携带Jurkat细胞中未内源表达的共刺激和抑制受体的三参数报告细胞。在这些实验中，我们表明共刺激分子4-1BB的结合增强了NF-κB和AP-1的活性，而通过PD-1或BTLA的共抑制则显著减少了NF-κB和NFAT的活性。BTLA的结合显著抑制了AP-1，而PD-1对该转录因子的激活几乎没有影响。我们的三参数报告T细胞系是评估共刺激和共抑制受体对NF-κB、NFAT和AP-1活性影响的优秀工具，具有广泛的应用范围，超出了对共刺激通路的评估。