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开发了一种快速而灵敏的检测方法,用于分析啮齿动物骨骼肌中肌球蛋白重链(MHC)mRNA的表达。仅需2微克的总RNA便可同时分析六种不同MHC基因的相对mRNA表达。我们设计了合成DNA片段作为内部标准,其中包含了成年MHC mRNA的I型、IIa型、IIx型、IIb型以及胚胎和新生儿MHC mRNA相关的引物序列。已知量的合成片段被加入到每个聚合酶链反应(PCR)中,产生的产物大小与扩增的MHC mRNA片段不同。扩增的MHC片段与合成片段的比例使我们能够计算给定肌肉样本中不同MHC基因的基因表达百分比。与传统的Northern印迹分析的比较结果表明,我们的逆转录酶-PCR检测方法在成年和新生大鼠骨骼肌中能够可靠、快速且在广泛的相对MHC mRNA表达范围内定量。此外,该检测方法的高灵敏度使其在组织样本数量有限时非常有用。针对所分析样本中每种MHC亚型信号的统计分析显示PCR信号与Northern信号之间存在高度显著的相关性,Pearson相关系数介于0.77到0.96之间(P < 0.005)。该检测方法在分析小肌肉样本(如活检以及来自胎前和/或新生阶段的样本)方面具有潜在的应用价值.
Wright等(Wed,)研究了这个问题。