细菌β-半乳糖苷酶作为Rous肉瘤病毒基因表达和复制的标志

我们开发了一种便捷且敏感的真核基因表达测定方法，使用大肠杆菌lacZ基因产物β-半乳糖苷酶作为非选择性标志。该系统已应用于分析Rous肉瘤病毒的复制和基因表达。禽类细胞被转染了编码gag基因N端部分与‘lacZ基因’的框架内基因融合的质粒，这需要转录和翻译的启动信号；这些信号由病毒的长末端重复序列和引导区提供。在转染细胞中合成了易于检测的β-半乳糖苷酶数量；结果表明，这些培养物中诱导的酶活性水平与输入DNA浓度呈线性增加，并与mRNA水平相关。通过使用含有src基因的Rous肉瘤病毒衍生载体和相关病毒作为辅助，可以证明lac序列与病毒生命周期的所有阶段兼容。gag-lacZ融合蛋白可以从稳定表达lacZ及src的培养物中免疫沉淀。来自稳定转染培养物的病毒导致受体细胞中持续表达lac和src。尽管缺乏认为对RNA包装入病毒体重要的序列，但某一特定构建体作为病毒高效传播。这里呈现的数据表明了lacZ作为逆转录病毒基因表达和复制的标志物的使用。