人类第 Va 因子的功能域表位图谱与人类和小鼠单克隆抗体的交互作用。重链与 Xa 因子和钙的相互作用的证据

我们从一名患者的血浆中纯化了一种独特的中和 IgG1、kappa 单克隆抗体 (MAb) 针对第 V 因子 (F-V)。该 MAb (H2) 显示出对人类 F-V 重链 (D)，分子量 105,000 的特异性。使用酶联免疫吸附测定 (ELISA) 我们评估了 H2、H1 (对轻链 F1F2 的人类 MAb) 和两个小鼠 MAb (B38 对 F1F2 和 B10 对激活肽 C1) 与 F-Va 的竞争结合。所有四种抗体都具有高亲和力，KD 从 0.17 到 1.17 X 10(-10) mol/L 不等。它们识别 F-V 中不同的表位。F-Xa 在无磷脂或血小板的条件下以浓度依赖的方式竞争 H1、H2 和 B38 结合 F-V/Va，而 B10 不参与竞争。因此，F-Va 的 F1F2 和 D 多肽而非 C1 与 F-Xa 相互作用。所有 MAb 在没有 Ca++ 的情况下与 F-V/Va 结合。然而，游离 Ca++ (0.1 至 4.0 mmol/L) 增加了 H1 和 H2 结合到第 V/Va 的量，分别增加 1.65 倍和 3.65 倍，但对小鼠 MAb 的结合影响不大。在没有磷脂的情况下，前凝血酶 (20 微克/mL 至 400 微克/mL) 并未抑制 MAb 的结合。这些研究首次提供了人类 F-Va 重链与 F-Xa 和 Ca++ 之间的直接相互作用的证据，并支持 F-Xa 在没有磷脂或血小板的情况下直接结合 F-Va，增强了我们对功能性 F-V 结构域的理解.