使用小麦胚芽凝集素亲和色谱法纯化和分析RNA聚合酶II转录因子。

我们最近发现许多RNA聚合酶II转录因子被N-乙酰氨基葡萄糖残基修饰。这些糖基赋予转录因子与小麦胚芽凝集素结合的能力。我们利用这种相互作用设计了一种用于"GC-box"结合转录因子Sp1的纯化程序。粗核提取物首先经过小麦胚芽凝集素亲和色谱法，然后经过特定序列DNA亲和色谱法。通过该程序纯化的Sp1蛋白至少纯度达到95%，总体回收率超过80%。除了提供比传统方案更多的Sp1量外，新纯化程序也更简单、快速。我们展示了小麦胚芽凝集素亲和色谱法还可以用来纯化CCAAT结合转录因子的糖基化形式。因此，小麦胚芽凝集素亲和色谱法可能有助于纯化其他带有N-乙酰氨基葡萄糖残基的转录因子。此外，通过小麦胚芽凝集素亲和色谱法将转录因子的糖基化形式与其非糖基化形式分离的能力，应有助于研究N-乙酰氨基葡萄糖残基在转录因子蛋白功能中的作用。