携带Tenascin-C的细胞外囊泡可作为临床生物标志物并改善胶质母细胞瘤患者肿瘤来源DNA分析

细胞外囊泡（EV）充当将生物信息从肿瘤传递到血液循环中的载体，从而能够检测循环肿瘤物质并追踪疾病进展。这在胶质母细胞瘤中尤为关键，该肿瘤具有高度侵袭性和异质性，监测难度大。利用成像流式细胞术（IFCM），我们对37例新诊断胶质母细胞瘤患者（手术前后）、11例匹配的复发性胶质母细胞瘤患者以及22例健康献血者（HD）血浆EV中的八种胶质瘤相关抗原和四跨膜蛋白进行了免疫表型分析。与非肿瘤受试者相比，Tenascin-C（TNC）阳性EV在新诊断和复发性胶质母细胞瘤患者中表现出最显著的差异。在双阳性亚群中，TNC+/CD9+ EV在新诊断患者（FC = 7.6，p <0.0001，AUC = 81%）和复发患者（FC = 16.5，p <0.0001；AUC = 90%）中较HD升高最为显著。与其他CNS肿瘤（n = 25）相比，胶质母细胞瘤中该亚群的水平也比脑膜瘤病例高34.5倍（p <0.01）。此外，胶质母细胞瘤患者（n = 6）脑脊液中TNC+/CD9+ EV水平较对照组升高3.3倍（p <0.05）。在不同来源且通过不同方法纯化的胶质母细胞瘤EV中也进一步观察到了异常的TNC水平。免疫组织化学分析显示肿瘤组织中TNC呈高表达。空间转录组学分析表明，胶质母细胞瘤切除标本的恶性细胞群中存在TNC过表达，特别是在具有间充质样特征和染色体异常的细胞中。最后，我们通过磁选法从21例胶质母细胞瘤患者的血浆中纯化了TNC+ EV，并通过微滴式数字PCR检测了致癌突变TERT*C228T。TNC+ EV中的突变等位基因频率显著高于TNC阴性EV（FC = 32，p <0.001）、总EV（FC = 5.3，p <0.001）或游离DNA（FC = 5.3，p <0.01）。总之，循环TNC+ EV在胶质母细胞瘤中具有作为临床生物标志物的潜力，且其纯化可改善液体活检中肿瘤特异性突变的鉴定。