人类剪接体内5′外显子的相互作用为外显子连接复合体的结构和组装建立了框架

前mRNA剪接的一般结果是，在剪接后的mRNA中，几个蛋白质会稳定地沉积在外显子-外显子连接的上游20-24个核苷酸（nt）处。这个外显子连接复合体（EJC）包含涉及mRNA出口、细胞质定位和无义介导的mRNA降解的因子。在这里，我们探讨了EJC组装的机制和时间。在剪接的过程中，5′外显子经历了涉及至少九种不同多肽的众多动态蛋白-RNA相互作用。在完全组装的剪接体内，这些相互作用为5′外显子中间体的最后25-27个nt提供了保护。伴随外显子的连接，5′外显子的3'末端的相互作用消失，新的物种与-24位点结合。对纯化的H、C和mRNP复合物进行质谱分析和西方印迹分析显示，至少有一个EJC成分REF/Aly可以在剪接体组装之前与前mRNA相互作用，而Y14、Magoh、RNPS1、UAP56和SRm160则是在含有中间体的剪接体中发现的。外显子连接后，RNPS1、UAP56和SRm160的结合变得不稳定。相反，REF/Aly、Y14和Magoh保持稳定地结合在剪接后的mRNA上，这表明这三种蛋白质是EJC核心的组成部分。