牛脑中磷酸肌醇特异性磷脂酶C的纯化。

从牛脑中纯化出一种可溶性磷酸肌醇特异性磷脂酶C（PLC），纯化倍数为58,000倍。该酶是脑中检测到的六种不同PLC活性之一，约占该组织中可溶性4,5-二磷酸磷脂酰肌醇-磷脂酶C（PIP2-PLC）活性的15%。纯化方案包括在phenyl-Sepharose上的疏水层析以及在磷脂酰肌醇-Sepharose（PI-Sepharose）上的亲和层析。使用PI、钙和去污剂特异性地将该酶从PI-Sepharose上洗脱。经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定，纯化的PLC估计分子量为88,000，且在甘油梯度沉降过程中表现为单体蛋白。该酶的活性需要钙，最适pH为6.5，且仅裂解磷酸肌醇。在所有测试条件下，PIP2和4-单磷酸磷脂酰水解速率均超过PI的水解速率。这些特性与该PLC在细胞钙动员早期事件中的潜在作用相一致。