含两条相同多肽链的血浆高密度载脂蛋白 ApoLp-Gln-II (ApoA-II) 的分离与表征

摘要 ApoLp-Gln-II（或 apoA-II）是人血浆高密度脂蛋白的两种主要载脂蛋白之一，通过 DEAE-纤维素层析从单例女性志愿者体内分离获得。经免疫电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳和氨基酸分析证实，纯化后的载脂蛋白具有均一性。其氨基酸组成的显著特征是不含组氨酸、精氨酸和色氨酸。还原和羧甲基化反应后，每摩尔完整的 apoLp-Gln-II 产生 2 摩尔的 S-羧甲基半胱氨酸。在还原前，几乎没有羧甲基基团能够加成到 apoLp-Gln-II 上，这表明完整的载脂蛋白中存在的是胱氨酸而非半胱氨酸。通过对完整载脂蛋白进行酶解并鉴定出胱氨酸，证实了这一点。在将 apoLp-Gln-II 还原并 S-羧甲基化后，通过 6 m 盐酸胍凝胶过滤测定的分子量从 16,700 ± 300 S.E.M. 下降至 8,950 ± 150 S.E.M.，表明 apoLp-Gln-II 由两条分子量相似的多肽链组成。在尿素存在条件下的聚丙烯酰胺凝胶电泳（pH 2.9 和 9.4）、免疫电泳和 DEAE-纤维素层析均显示这两条链是相同的。通过丹磺酰氯法或异硫氰酸苯酯法均未检测出 NH2-末端氨基酸，但用吡咯烷酮羧基肽酶消化 apoLp-Gln-II 可释放出吡咯烷酮羧酸。羧肽酶 A 消化可释放出谷氨酰胺和苏氨酸。释放动力学以及肼解未能检测出苏氨酸的结果表明，谷氨酰胺是 COOH-末端氨基酸，而苏氨酸是倒数第二个残基。这些研究表明，apoLp-Gln-II 由两条通过单个二硫键连接的相同多肽链组成。每条链均具有 NH2-末端吡咯烷酮羧酸和 COOH-末端谷氨酰胺。经还原和 S-羧甲基化的链组成为：Cys(Cm)1、PCA1、Asp2、Asn1、Thr6、Glu8、Gln7、Pro4、Gly3、Ala5、Val6、Met1、Ile1、Leu8、Tyr4、Phe4 和 Lys9。每条多肽链含有 77 个残基，分子量为 8690。